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SF/Z  JD0107022——2018

毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-串联质谱检验方法

Determination of Δ⁹-tetrahydrocannabinol, cannabidiol and cannabinol in hair by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

2018-11-08 发布  2019-01-01 实施

中华人民共和国司法部公共法律服务管理局       发  布

 

目             次

前言 

1. 范围 

2. 规范性引用文件 

3. 术语和定义

4. 原理 

5. 试剂、仪器和材料

6. 操作方法 

7. 分析结果评价

附录 A（资料性附录）    毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的 MRM 色谱图  

附录 B（资料性附录）       方法学有效性验证数据 

表 1    流动相梯度洗脱程序

表 2    Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚和内标物的定性离子对、定量离子对和保留时间  

表 3    相对离子对丰度比的最大允许相对误差

 

前      言

本技术规范按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本技术规范由司法鉴定科学研究院提出。

本技术规范由司法部公共法律服务管理局归口。

本技术规范起草单位：司法鉴定科学研究院。

本技术规范主要起草人：向平、沈敏、刘伟、沈保华、卓先义、严慧、吴何坚。

本技术规范的附录 A、B 为资料性附录。

本技术规范为首次发布。

 

毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-串联质谱检验方法

1    范围

本技术规范规定了毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）

检验方法。

本技术规范适用于毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-串联质谱定性与定量分析。

2    规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GA/T 122     毒物分析名词术语

GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法

 

3    术语和定义

GA/T 122     中界定的术语和定义适用于本技术规范。

4    原理

毛发样品经清洗、冷冻研磨后，以甲醇超声法提取，用液相色谱-串联质谱的多反应监测(MRM)模式检测。经与平行操作的空白样品和添加样品对照，以保留时间、质谱特征碎片离子峰和离子对相对丰

度比进行定性分析；以峰面积为依据，采用内标法进行定量分析。

 

5    试剂、仪器和材料

 

5.1    试剂

 

本技术规范试验用水为一级水（见GB/T 6682规定），所用试剂：

1. a) 甲醇：HPLC级；
2. b) 乙腈：HPLC级；
3. c) 50%甲酸溶液：HPLC级；
4. d) 乙酸铵：HPLC级；
5. e) 丙酮：分析纯；
6. f) 20mmol/L乙酸铵溶液（含 1%甲酸）：分别称取 1.54g 乙酸铵和 2mL 甲酸溶液置于 1000mL

容量瓶中，加水定容至刻度，pH 值约为 4；

1. g) 内标为甲氧那明或其它合适内标物；

 

 

 

1. h) 标准物质溶液：

1)     100µg/mLD9-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚标准溶液：市售D9-四氢大麻酚、大麻二酚、

大麻酚标准物质溶液均置于冰箱中冷冻保存，保存时间 12 个月；

2)    Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚标准工作液：试验中所用其他浓度的标准工作溶液均

由 100µg/mL Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚标准溶液用甲醇稀释而得，置于冰箱中冷

藏保存，保存时间 6 个月；

1. i) 内标甲氧那明标准溶液：

1)     1.0mg/mL 甲氧那明标准储备溶液：精密称取甲氧那明 10mg 于 10mL 容量瓶中，加入适

量甲醇溶解并定容至刻度，配制成 1.0mg/mL 甲氧那明标准储备溶液。密封，置于冰箱中

冷冻保存，保存时间 12 个月；

2)     1ng/mL 甲氧那明标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 甲氧那明标准储备溶液适量至容量瓶中，

加入甲醇稀释，混匀，配制成 1ng/mL 的甲氧那明标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏

保存，保存时间 3 个月。

 

5.2    仪器和材料

 

仪器和材料包括：

1. a) 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；
2. b) 电子分析天平：感量1mg；
3. c) 离心机；
4. d) 超声波清洗仪；
5. e) 恒温水浴锅；
6. f) 冷冻研磨仪；
7. g) 移液器。

 

6    操作方法

 

6.1    定性分析

 

6.1.1     样品前处理

 

6.1.1.1      案件样品

 

毛发样品依次用适量的水和丙酮振荡洗涤两次，晾干后剪成约1mm段，置冷冻研磨仪中磨碎，呈

粉末状。

称取毛发粉末样品20mg，加入1.0mL内标甲氧那明标准工作液（甲氧那明1ng/mL），超声30min，

离心，转移上清液，于60℃水浴空气流下吹干。残留物用100mL甲醇复溶，供仪器检测。

 

6.1.1.2      控制样品

 

称取空白毛发粉末样品20mg两份，一份作为空白样品，一份添加Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻

酚标准工作溶液，制得0.05ng/mg毛发添加样品，余下同6.1.1.1，与案件样品平行操作。

 

6.1.2     仪器检测

 

6.1.2.1      仪器条件

 

6.1.2.1.1      液相色谱条件

以下为参考条件，可根据不同仪器实际情况进行调整：

2. a) 色谱柱：RestekAllure® PFP Propyl  五氟苯基柱（或其它等效柱），100mm ´1mm  ，5mm

注：Restek Allure® PFP Propyl柱为美国Restek公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本技术规范的使用者，

并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

1. b) 流动相：A为 20mmol/L 乙酸铵和 1 %甲酸缓冲液，B 为乙腈，流动相梯度洗脱程序见表 1；

表1   流动相梯度洗脱程序

时间(min)	流动相A(%)	流动相B(%)
0	50	50
2.0	5	95
5.0	5	95
5.1	50	50
10.0	50	50

 

1. c) 流速：300mL/min；
2. d) 柱温：室温；
3. e) 进样量：5µL。

 

6.1.2.1.2      质谱条件

 

以下条件作为参考，可根据不同仪器实际情况进行调整：

1. a) 离子源：电喷雾电离-正离子模式(ESI+)；
2. b) 检测方式：多反应监测(MRM)；
3. c) 离子源电压(IS)：5500V；
4. d) 碰撞气(CAD)、气帘气(CUR)、雾化气(GS1)、辅助气(GS2)均为高纯氮气，使用前调节各气流

流量以使质谱灵敏度达到检测要求；

1. e) 去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)等电压值应优化至最佳灵敏度。

在以上色谱、质谱条件下，Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚和内标物的定性离子对、定量

离子对和保留时间见表 2。毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的 MRM 色谱图参见附录 A。

表2  Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚和内标物的定性离子对、定量离子对和保留时间

化合物	定性离子对 /(m/z)	定量离子对 /(m/z)	保留时间/ (min)
Δ9 -四氢大麻酚	315.2/193.2	315.2/193.2	2.69
	315.2/259.1
大麻二酚	315.2/193.2	315.2/193.2	3.07
	315.2/259.1
大麻酚	311.1/223.2	311.1/223.2	3.10
	311.1/293.3
甲氧那明(内标)	180.2/148.8	180.2/148.8	7.76

 

 

 

6.1.2.2      进样

 

分别吸取案件样品、空白样品和添加样品提取液，按6.1.2.1条件进样分析。

 

6.1.2.3      记录

 

记录各样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚可疑色谱峰的保留时间和离子对丰度比。

 

6.1.2.4      定性判断依据

 

以保留时间、质谱特征碎片离子峰和离子对相对丰度比作为定性判断依据。

如果案件样品中出现Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚的两对定性离子对的特征色谱峰，保留时

间与添加样品中相应标准物质的色谱峰保留时间比较，相对误差在±2.5 %内，且定性离子对丰度比与质

量分数相近添加样品的离子对丰度比之相对误差不超过表 3 规定的范围，则可认为样品中存在该种目标

物。

表3   相对离子对丰度比的最大允许相对误差(%)

相对离子对丰度比	>50	>20~50	>10~20	£10
允许的相对误差	±20	±25	±30	±50

 

6.2    定量分析

 

本技术规范采用内标法定量分析。

 

6.2.1     样品前处理

 

取毛发案件样品两份，按6.1.1.1操作。

另取空白毛发样品若干份，添加适量Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚，制得系列质量分数或单

点质量分数的添加样品，与案件样品平行操作。方法学有效性验证数据参见附录B。

案件样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚的质量分数应在工作曲线的线性范围内。配制单点

质量分数的添加样品时，案件样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚质量分数需在添加样品质量分

数的±50 %内。

 

6.2.2     仪器检测

 

6.2.2.1      仪器参考条件同 6.1.2.1。

 

6.2.2.2      进样

 

分别将案件样品、系列质量分数的添加样品或单点质量分数添加样品，按6.1.2.1条件进样分析。

 

6.2.3     记录与计算

 

记录案件样品、系列质量分数的添加样品或单点质量分数添加样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚或

大麻酚及内标物的峰面积值，然后计算案件样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚或大麻酚含量。

 

6.2.3.1       内标-工作曲线法

在系列质量分数的添加样品中，以Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚与内标物定量离子对的峰面

积比(Y)为纵坐标、Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚质量分数(C)为横坐标进行线性回归，得线性方程。

根据案件样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚及内标物定量离子对的峰面积值，按公式(1)计

算出案件样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚或大麻酚的含量。

式中：

C ⎯⎯案件样品中目标物的质量分数，单位为纳克每毫克(ng/mg)；

Y⎯⎯案件样品中目标物与内标物定量离子对的峰面积比；

a ⎯⎯线性方程的截距；

b ⎯⎯线性方程的斜率。

 

6.2.3.2       内标-单点校正法

根据案件样品和添加样品中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚及内标物定量离子对的峰面积值，

按公式(2)计算含量：

式中：

C ⎯⎯案件样品中目标物的质量分数，单位为纳克每毫克(ng/mg)；

A⎯⎯案件样品中目标物与内标物的峰面积比值；

A′⎯⎯添加样品中目标物与内标物的峰面积比值；

c ⎯⎯添加样品中目标物的质量分数，单位为纳克每毫克(ng/mg)。

 

6.2.4      计算相对相差

 

案件样品按以上步骤平行测定两份，双样相对相差按公式(3)计算：

式中：

RD⎯⎯相对相差(%)；

C1、C2⎯⎯两份案件样品平行定量测定的结果，单位为纳克每毫克(ng/mg)；

 

C ⎯⎯两份案件样品平行定量测定结果的平均值(C1+ C2)/ 2，单位为纳克每毫克(ng/mg)。

 

 

7    分析结果评价

 

7.1     定性分析结果评价

 

7.1.1      阴性结果评价

 

 

如果案件样品中未检出Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚，添加样品中检出Δ⁹-四氢大麻酚、大麻

二酚、大麻酚，则阴性结果可靠；如果添加样品中未检出Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚，则阴性

结果不可靠，应按6.1重新提取检验。

 

7.1.2     阳性结果评价

 

如果案件样品中检出Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚且空白样品无干扰，则阳性结果可靠；如

果空白样品亦呈阳性，则阳性结果不可靠，应按6.1重新提取检验。

 

7.2    定量分析结果评价

 

两份案件样品的相对相差不超过  20%时，结果按两份案件样品含量的平均值计算。否则需要重新

测定。

 

附   录     A

（资料性附录）

毛发中Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的 MRM 色谱图

 

A.1    空白头发MRM色谱图

图A.1   空白头发 MRM 色谱图

A.2    头发添加样品的MRM色谱图

图A.2      空白头发中添加 0.05ng/mg 的Δ⁹-四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚 MRM 色谱图

 

附   录     B

（资料性附录）

方法学有效性验证数据

 

 

B.1    工作曲线、最低检出限(LOD)和定量下限(LOQ)

表B.1   工作曲线、最低检出限和定量下限

化合物	线性范围/(ng/mg)	线性方程	相关系数/ r	LOD/ (ng/mg)	LOQ/ (ng/mg)
Δ9 -四氢大麻酚	0.05~2.5	y=0.3716x-0.0057	0.9978	0.05	0.05
大麻二酚	0.05~2.5	y=0.1644x-0.0025	0.9963	0.05	0.05
大麻酚	0.05~2.5	y=0.8379x-0.0133	0.9956	0.05	0.05

 

B.2    方法准确度、精密度

表B.2      头发中Δ⁹ -四氢大麻酚、大麻二酚、大麻酚测定的精密度和准确度

化合物	添加样品含量/ (ng/mg)	准确度/ (%) (n=24)	精密度/ RSD(%)
			日内(n=6)	日间(n=24)
Δ9 -四氢大麻酚	0.05	108.1	4.4	19.5
	0.4	107.7	6.0	15.2
	2	102.8	5.6	14.6
大麻二酚	0.05	111.4	8.7	13.0
	0.4	101.7	5.6	13.8
	2	96.1	11.3	13.4
大麻酚	0.05	119.9	11.4	17.4
	0.4	107.7	5.3	16.0
	2	103.1	4.0	13.6